Наредба № 18 от 10 юни 2004 г. за условията и реда за извършване на диагностика, преработка и съхранение на кръв и кръвни съставки и качеството на кръвта от внос

Изисквания към тест-реагентите и тестеритроцитите, използвани за имунохематологична диагностика

1. Тест-реагентите за изследване на антигените от системата АВО могат да бъдат моноклонални или поликлонални със специфичност анти-А, анти-В, анти- А+В или анти-А,В. Те трябва да притежават следните качества:

а) активност—неразреден, тест-реагентът трябва да дава 3 до 4 плюса реакция в аглутинационен епруветъчен тест с 3 % еритроцитна суспенсия при стайна температура;

б) специфичност—тест-реагентът трябва да дава отчетлива реакция с еритроцити, носещи съответния антиген, без данни за хемолиза, фалшиво положителни и фалшиво отрицателни реакции;

в) титър—изследва се по метод, указан от производителя; титрите трябва да бъдат не по-ниски от 128 за анти-А, анти-В и анти-АВ с А1 и В тест-еритроцити и не по-ниски от 64 с А2 и А2В тест-еритроцити; този показател не се отнася до моноклонални реагенти.

2. Тест-реагентите за изследване на антигените от системата Rhesus по произход могат да бъдат моноклонални или поликлонални, моноспецифични със специфичност анти-D, анти-С, анти-с, анти-Е, анти-е или полиспецифични анти-С+D, анти-D+E и анти- С+D+Е. Те трябва да притежават следните качества:

а) активност—неразреден, тест-реагентът трябва да дава 3 до 4 плюса реакция с тест-еритроцити, носещи съответния антиген, по указан от производителя метод;

б) специфичност—тест-реагентът трябва да дава отчетлива реакция с еритроцити, носещи съответния антиген, без данни за хемолиза, фалшиво положителни и фалшиво отрицателни реакции;

в) титър—не по-нисък от 16 с тест-еритроцити със следния RH фенотип:

ва) за анти-D тест-реагенти—ccDee и CcDee;

вб) за анти-С тест-реагенти—СсDее или Ccdee;

вв) за анти-Е тест-реагенти—ccDEe или ccdEe;

вг) за анти-c тест-реагенти—CcDee или Ccdee;

вд) за анти-е тест-реагенти—ccDEe или ccdEe.

3. Тест-реагентите за изследване на антигени от други кръвногрупови системи извън АВО и Rh системата могат да бъдат моноклонални или поликлонални. Те трябва да притежават следните качества:

а) активност—неразреден, тест-реагентът трябва да дава 3 до 4 плюса реакция с тест-еритроцити, носещи съответния антиген, по указан от производителя метод;

б) специфичност—тест-реагентът трябва да дава отчетлива реакция с еритроцити, носещи съответния антиген, без данни за хемолиза, фалшиво положителни и фалшиво отрицателни реакции.

4. Тест-еритроцити:

а) антигенната формула на тест-еритроцитите, използвани за имунохематологична диагностика, се определя предварително с два комплекта тест-реагенти за всяка специфичност;

б) тест-еритроцитите трябва да притежават следните качества:

ба) реактивност—тест-еритроцитите трябва да дават ясно изразена аглутинация с определен тест-реагент по метод, указан от производителя;

бб) специфичност— с изключение на сенсибилизираните с IgG и С3 еритроцити всички тест-еритроцити трябва да дават отрицателна реакция в директен антиглобулинов тест с полиспецифичен антиглобулинов тестреагент;

в) тест-еритроцитите, използвани в скрининг за антиеритроцитни антитела, трябва да съдържат антигени, откриващи клинично значими антитела— С,с,D,Е,е, Кк, Fya, Fyb, Jka,Jkb,S,s, M,N, P1,Lea,Leb:

ва) препоръчва се единият вид от тест-еритроцитите да бъде с Rh хаплотип сDЕ;

вб) използваните тест-еритроцити да носят антигените D,E,Fya,Fyb,Jka,Jkb,S,s в хомозиготна форма;

вв) не се допуска смесването (пулирането) на тестеритроцити от различните източници; всеки вид тестеритроцити се използва поотделно.

5. Полиспецифичният античовешки антиглобулинов серум (АГС) съдържа анти-IgG и анти-С3 /C3d антитела с качества:

а) активност—полиспецифичният АГС аглутинира еритроцити, сенсибилизирани с антитела от клас IgG и комплемент;

б) специфичност—полиспецифичният АГС не трябва да има хемолитична активност и да аглутинира несенсибилизирани еритроцити.

6. Физиологичният разтвор е изотоничен разтвор на натриев хлорид (0,154 М/л = 9 г/л) с рН 7 ± 0,2 при температура + 22° ± 1°С.

7. Солевият разтвор с ниска йонна сила (LISS) е 0,03 М разтвор на натриев хлорид, 0,003 М Na2HPO4: NaH2PO4 с рН 6,7 при температура + 22° ± 1°С и 0,24 М Glycin. Крайният разтвор е с рН 6,7 (от 6,5 до 7) и проводимост 3,7 ms/cm при +22° ± 1°С (от 3,44 до 3,75).

8. Протеази—използват се, контролират се и се съхраняват съгласно указанията на производителя.

9. Контролът на тест-реагентите се осъществява в имунохематологичната лаборатория при получаване на всяка доставка тест-реагенти и тест-еритроцити и преди всяка серия изследвания.

10. Контрол на тест-реагентите и тест-еритроцитите при получаване на доставката:

а) контрол на тест-реагентите—в зависимост от обема на доставката се изследва не по-малко от 1 % от индивидуалните контейнери от всеки реагент или поне един индивидуален контейнер от всеки тест-реагент; този контрол включва:

аа) изследване на активността с тест-еритроцити от 3 различни източника;

аб) изследване на специфичността с тест-еритроцити от 3 различни източника;

ав) изследване на титъра с тест-еритроцити от 3 различни източника;

б) контрол на тест-еритроцитите—броят на изследваните контейнери се определя от обема на доставката, но не трябва да е по-малко от един индивидуален контейнер; този контрол включва:

ба) изследване на реактивността с тест-реагенти от два източника;

бб) изследване на специфичността с тест-реагенти от два източника;

в) изследванията се извършват по методите, указани от производителите;

г) резултатите се документират в определен за целта дневник;

д) по един индивидуален контейнер от всеки тестреагент се съхранява един месец след изтичане срока на годност на партидата.

11. Контрол на тест-реагентите и тест-еритроцитите преди всяка серия изследвания:

а) контролът на тест-реагентите включва:

аа) изследване за активност—с тест-еритроцити от един източник;

аб) изследване за специфичност—с тест-еритроцити от един източник;

б) контролът на тест-еритроцитите включва:

ба) изследване за активност—с тест-реагенти от един източник;

бб) изследване за специфичност—с тест-реагенти от един източник;

в) изследванията се извършват по методите, указани от производителите;

г) резултатите се документират в определен за целта дневник.

Приложение на кръв и кръвни съставки с положителен скрининг за антиеритроцитни антитела

Кръв/кръвна Резултат при Приложение съставка разреждане 1: 10 1:50

1

2

3

4

Кръв положиположи- Не се прелива телен телен положиотрица- Прелива се, но телен телен не при новородени Еритроцитни положиположи Не се прелива концентрати телен телен положиотрица- Прелива се, но телен телен не при новородени ПЗП положиположи- Не се прелива телен телен или отрицателен отрицаотрица- Прелива се, но телен телен не при новородени

1

2

3

4

Тромбоцитен положиположи- Не се прелива концентрат телен телен или отрицателен отрицаотрица- Прелива се, но телен телен не при новородени Плазма за положиположи- Не се фракфракционителен телен ционира ране положиотрица- Фракциотелен телен нира се

Технологични вериги за преработка на стандартни единици кръв в зависимост от продължителността на кръвовземането и продължителността и температурата на съхранение на дарената кръв до преработката

Продължи- Темпера- Начало Кръвни съставки, телност на тура на на преракоито могат да кръвосъхранеботката бъдат получени вземането ние и в часове в минути транспорт до преработката

До 15 мин. Еритроцитни концентрати ПЗП 16 и повече До 6 час Еритроцитни минути концентрати Плазма с намале- 2—6° С но съдържание на лабилни коагулационни фактори Еритроцитни концентрати Плазма с намале- След 6 час но съдържание на лабилни коагулационни фактори

До 12 ми- 20—24° С Еритроцитни нута концентрати Тромбоцитни концентрати ПЗП (вкл. и бедна на тромбоцити) 13—15 ми- До 18 час Еритроцитни нута концентрати ПЗП 16 и повече Еритроцитни минути концентрати Плазма с намалено съдържание на лабилни коагулационни фактори След 18 час Еритроцитни концентрати Плазма с намалено съдържание на лабилни коагулационни фактори

Кръв/Кръвна Температура Продължителност Температура на Време за съставка на съхранение на съхранение транспортиране транспортиране

Прясна замразена -18°С—-25°С 3 месеца Сходна с тази на плазма под -25°С 24 месеца съхранение

Размразена Размразена Прелива се непоплазма при +30°С—+37°С средствено след размразяване Тромбоцитни +20°С—+24°С 5 дни (при постоян- Сходна с тази на съхконцентрати—от но внимателно разранение (при постоянно една единица, клащане) по-малко от внимателно разклапул от афереза 6 часа (при отворена щане) система) Замразени тром- Замразени тром- До 12 Сходна с тази на съхбоцитни концентбоцитни конценмесеца ранение рати от афереза трати се съхраняват при: -80°С (в електрически фризер) Повече от -150°С (в парите на 12 месеца течен азот) Размразени тром- Използват боцитни концентсе веднага рати се съхраняват след разпри +20°С—+24°С мразяване при подходящо разклащане, ако се изисква краткотрайно съхранение Еритроцитни +2°С—+6°С До 35 дни (при анти- +2°С—+10°С По-малко от 24 часа концентрати коагулант с прибавен аденин) Еритроцитни +2°С—+6°С В зависимост от анти- +2°С—+10°С По-малко от 24 часа концентрати с коагуланта и добадобавен разтвор вения разтвор Еритроцитни +2°С—+6°С В зависимост от анти- +2°С—+10°С По-малко от 24 часа концентрати с добакоагуланта и добавевен разтвор с отстрания разтвор. нена левкоцитно- Обикновено 35 дни тромбоцитна пелена Еритроцитни +2°С—+6°С До 35 дни (при анти- +2°С—+10°С По-малко от 24 часа концентрати с накоагулант с прибавен малено съдържание аденин). на левкоцити По-малко от 24 часа при отворена система Еритроцитни -140°—-150°С в 10 години Сходна с тази на съх- Замразени еритроцитни концентрати, зампарите на течен азот ранение концентрати: колкото разени по метод с може по-кратко. ниско съдържание +2°С—+6°С след По-малко от 24 часа, Размразени еритроцитни на глицерол размразяване да се използват колконцентрати: да се прекото може по-бързо ливат до 24 часа след след размразяване размразяването Еритроцитни -60°С—-80°С в елек- 10 години Сходна с тази на съх- Замразени еритроцитни концентрати, замтрически фризер ранение концентрати: колкото разени по метод с може по-кратко. високо съдържание +2°С—+6°С след По-малко от 24 часа, Размразени еритроцитни на глицерол размразяване да се използват колконцентрати: да се прекото може по-бързо ливат до 24 часа след след размразяване размразяването Промити еритро- +2°С—+6°С По-малко от 24 часа +2°С—+6°С Ограничено от съответцитни концентрати при приготвяне при ното време на съхраниски температури. нение По-малко от 6 часа при приготвяне при стайна температура Кръв (за преливане) +2°С—+6°С До 35 дни (при анти- +2°С—+10°С По-малко от 24 часа коагулант с прибавен аденин) Кръв (за приготвяне +1°С—+6°С До 8 часа преди на кръвни съставки) употреба +20°С- +24°С (ако До 24 часа преди се използва за полуупотреба чаване на тромбоцити)

Приблизителен състав на получаваната плазма при прилагането на четирите метода на начално центрофугиране по приложение № 6

Таблица 1

I II III IV V—след филтриране

Обем в мл 220—280 220—280 270—320 270—330 240—290

Тромбоцити 70—80 % 70—80 % 10—20 % 10—20 % <1 %

Левкоцити 5—10 % 5—10 % 2—5 % 2—5 % <0,01 %

Приблизителен състав на получавания еритроцитен концентрат при прилагането на четирите метода на начално центрофугиране по приложение № 6

Таблица 2

I II III IV V—след филтриране

Хематокрит 0,75—0,80 0,65—0,75 0,85—0,90 0,80—0,90 0,80—0,90

Тромбоцити 5—15 % 20—30 % 10—20 % 80—90 % <1 %

Левкоцити 25—45 % 90—95 % 25—45 % 95—98 % <0,01 %

Приблизителен състав на получавания слой от левкоцити и тромбоцити при прилагането на четирите метода на начално центрофугиране по приложение № 6

Таблица 3

I II III IV V—след филтриране

Хематокрит 0,50—0,70 0,40—0,60

Еритроцити 10—15 % 10—15 %

Тромбоцити 10—25 % 80—90 %

Левкоцити 60—70 % 50—70 %

Приблизителен състав на тромбоцитен концентрат, получаван от богата на тромбоцити плазма чрез допълнително центрофугиране

Таблица 4

Обем на средата за суспендиране в мл 50—60

Брой тромбоцити 45—85 Ч 109

Брой левкоцити < 1,0 Ч 109

Брой еритроцити < 1,0 Ч 109

Методи за начално центрофугиране на кръв от стандартно даряване (450 мл ± 10 % в 63 мл изходен кръвоконсервиращ разтвор)

Параметри Метод

I II III IV V

Първично Тромбофилтриране Не Не Не Не левкоцитен филтър

Скорост на центрофугиране ниска ниска висока висока висока

Време на центрофугиране 4—15 минути 4—15 минути 4—15 минути 4—15 минути 4—15 минути

Температура 6°/22° С 6°/22° С 6°/22° С 6° С 6° С

Съставки, които Плазма Плазма се получават + + Плазма Левкоцитно- Плазма Левкоцитно- Плазма + тромбоцитна + тромбоцитна + Обезлевкоцитени пелена Еритроцити пелена Еритроцити еритроцити + + Еритроцити Еритроцити

Показатели за качество на крайни кръв и кръвни съставки за клинично приложение

№ Кръв и кръвни Определение Параметър за Изисквания за Честота на Контролът се съставки контролиране качество контрола осъществява от

1

2

3

4

5

6

Всички единици АВО, Rh(D) определяне на всички Лаборатория за кръв или кръвни групите единици кръвни групи съставки

Антиеритровсички Лаборатория за цитни антитела единици кръвни групи Anti-HIV-1 2 отрицателен по всички Скрининг приетия скрининединици лаборатория гов тест HBsAg отрицателен по всички Скрининг приетия скрининединици лаборатория гов тест Anti-HCV отрицателен по всички Скрининг приетия скрининединици лаборатория гов тест Сифилис отрицателен по всички Скрининг приетия скрининединици лаборатория гов тест 1. Кръв Кръв за преливане Обем 450 мл+/- 10 % 1 % от Отделение за е кръвта, взета от обем без антивсички преработка подходящ донор в коагулант. единици стерилен апироге- Нестандартните при мининен контейнер (сак) единици трябва мум 4 едис антикоагулант. да се етикетират ници ме- Кръвта се използва по подходящ сечно главно като изходен начин материал за получаване на кръвни съставки

Хемоглобин минимум 45 г за 4 единици Контролна единица месечно лаборатория Хемолиза в <0,8 % от ерит- 4 единици Контролна края на съхрароцитната маса месечно лаборатория нението 2. Еритроцитен Съставка, получена Обем 280 +/- 50 мл 1 % от Отделение за концентрат чрез отнемане на всички преработка част от плазмата на единици кръв, без по-нататъшна обработка

Хематокрит 0,65 до 0,75 4 единици Контролна на месец лаборатория Хемоглобин минимум 45 г за 4 единици Контролна единица на месец лаборатория Хемолиза в <0,8 % от ер. 4 единици Контролна края на съхрамаса на месец лаборатория нението 3. Еритроцитен кон- Съставка, получена Обем 250 +/- 50 мл 1 % от Отделение за центрат с отстрачрез отделяне на всички преработка нена левкоцитна част от плазмата и единици пелена (еритролевкоцитната пелена цити BCR) от еритроцитен концентрат

Хематокрит 0,65 до 0,75 4 единици Контролна на месец лаборатория Хемоглобин минимум 43 г за 4 единици Контролна единица на месец лаборатория Левкоцити* <1,2 Ч 109 4 единици Контролна (брой/единица) на месец лаборатория Хемолиза в <0,8 % от ер. 4 единици Контролна края на съхрамаса на месец лаборатория нението

1

2

3

4

5

6

4. Еритроцитен кон- Съставка, получена Обем дефинира се от 1 % от Отделение за центрат с добавен от кръв чрез центроизползваната всички преработка разтвор (еритрофугиране и отделяне система единици цити AS) на плазмата с последващо добавяне към еритроцитите на подходящ хранителен разтвор

Хематокрит 0,50 до 0,70 4 единици Контролна на месец лаборатория Хемоглобин минимум 45 г / 4 единици Контролна единица на месец лаборатория Хемолиза в <0,8 % от ер. 4 единици Контролна края на съхрамаса на месец лаборатория нението 5. Еритроцитен кон- Съставка, получена Обем дефинира се от 1 % от Отделение за центрат с добавен от кръв чрез центроизползваната всички преработка разтвор, с отстрафугиране, отделяне система единици нена левкоцитна на плазмата и левпелена (еритрокоцитната пелена с цити AS-BCR) последващо ресуспендиране на еритроцитите в подходящ хранителен разтвор

Хематокрит 0,50 до 0,70 4 единици Контролна на месец лаборатория Хемоглобин минимум 43 г за 4 единици Контролна единица на месец лаборатория Левкоцити* <1,2 Ч 109 4 единици Контролна брой/единица на месец лаборатория Хемолиза в <0,8 % от ер. 4 единици Контролна края на съхрамаса на месец лаборатория нението 6. Еритроцитен Съставка, получена Обем дефинира се от всички Отделение за концентрат, от кръв чрез центроизползваната единици преработка промит фугиране и отделяне система на плазмата, с последващо промиване на еритроцитите в изотоничен разтвор

Хематокрит 0,65 до 0,75 всички Контролна единици лаборатория Хемоглобин минимум 40 г за всички Контролна единица единици лаборатория Хемолиза в <0,8 % от ер. всички Контролна края на съхрамаса единици лаборатория нението Общ белтък на <30 мг за всички Контролна крайната суперединица** единици лаборатория натанта 7. Еритроцитен кон- Съставка, получена Остатъчни <1 Ч 106 за 1 % от Отделение за центрат, обезлевчрез отстраняване на левкоцити* единица всички преработка коцитен по-голяма част от единици левкоцитите от ерипри минитроцитния конценмум 10 трат единици месечно Хемоглобин минимум 40 г 1 % от Контролна за единица всички лаборатория единици при минимум 4 единици месечно Хемолиза в <0,8 % от ер. 4 единици Контролна края на съхрамаса на месец лаборатория нението

1

2

3

4

5

6

8. Еритроцитен кон- Съставката се полу- Обем >185 мл всички Лаборатория за центрат, замразен чава от кръв, като единици преработка еритроцитите се замразяват, за предпочитане до 7-ия ден от вземането на кръвта, с помощта на криопротектор и се съхраняват при температура -80°С или по-ниска. Преди употреба клетките се размразяват, промиват и суспендират във физиологичен разтвор или добавен хранителен разтвор за еритроцитни концентрати

Хемоглобин*** <0,2 г за единица всички Контролна (супернатант) единици лаборатория Хематокрит 0,65—0,75 всички Контролна единици лаборатория Хемоглобин >36 г за единица всички Контролна единици лаборатория Осмоларитет <340 mOsm/л 1 % от Лаборатория за всички преработка единици при минимум 4 единици месечно Левкоцити* <0,1 Ч 109 1 % от Контролна всички лаборатория единици при минимум 4 единици месечно Стерилност Стерилни 1 % от Контролна всички лаборатория единици при минимум 4 единици месечно 9. Тромбоцитен Съставка, получена HLA или HPA Типизиране Когато се HLA лаборатория концентрат от от една единица (когато се изисква единица кръв кръв, съдържаща в изисква) ефективна лечебна форма по-голямата част от изходното съдържание на тромбоцити

Обем > 40 мл Всички Лаборатория за единици преработка Брой тромбо- > 60 Ч 109 за 1 % от Контролна цити* еквивалент на всички лаборатория една единица единици, но не помалко от 10 единици месечно Остатъчни левкоцити* Преди обезлевкоцитяване А. Получени < 0,2 Ч 109 за 1 % от всич- Контролна от БТП еквивалент на ки единици, лаборатория една единица но не по-мал- Б. Получени < 0,05 Ч 109 за ко от 10 едиот ЛТП еквивалент на ници месечно една единица

1

2

3

4

5

6

Остатъчни < 0,2 Ч 109 за 1 % от Контролна левкоцити* еквивалент на всички лаборатория една единица единици, След обезлевно не покоцитяване малко от 10 единици месечно рН изме- 6,8 до 7,4 1 % от Контролна рено**** всички лаборатория (+22°С) в края единици, на срока на но не погодност малко от 4 единици месечно 10. Тромбоцитен Съставка, получена Обем > 40 мл за Всички Лаборатория за концентрат, поот един дарител чрез 60 Ч 109 тромбоединици преработка лучен чрез афереза тромбоцитофереза цити с използване на апарати за автоматично отделяне на клетките

Брой тром- > 200 Ч 109 за 1 % от Контролна боцити* единица всички лаборатория единици, но не помалко от 10 единици месечно Остатъчни 1 % от Контролна левкоцити всички лаборатория След обезлев- < 1 Ч 106 за единици, коцитяване* стандартна но не поединица малко от 10 единици месечно рН 6,8 до 7,4 1 % от Контролна измерено***** всички лаборатория (+22°С) в края единици, на срока на но не погодност малко от 4 единици месечно HLA или HPA Типизиране Когато се HLA лаборатория (когато се изисква изисква) 11. Прясно замразена Съставка, изготвена Обем Отбелязаният всички Лаборатория за плазма от кръв или от плазобем +/- 10 % единици преработка ма, получена чрез афереза и замразена за период и до температура, които позволяват адекватно поддържане на лабилните фактори на съсирването във функционално състояние

Фактор VIIIс > 70МЕ за На всеки Контролна 100 мл 2 месеца: лаборатория а) пул от 6 единици с различни кр. групи по време на първия месец на съхранение;

б) пул от 6 единици с различни кр. групи през последния месец на съхранение

1

2

3

4

5

6

Остатъчни Еритроцити: 1 % от Контролна клетки <6 Ч 109/l всички лаборатория Левкоцити: единици при <0,1 Ч 109/l минимум 4 Тромбоцити: единици <50 Ч 109/l месечно

Изтичане Не се допуска Всички Лаборатория за никакво изтичане единици преработка от нито една част на сака при оглед след притискане с плазмаекстрактор, преди замразяване и след размразяване

Видими Не се допуска Всички Лабораторията, промени абнормен цвят единици получила продукта или видими съсиреци

* Приема се, че на тези изисквания е отговорено, ако 90 % от контролираните единици попадат в границите на посочените стойности. ** Това количество общ белтък гарантира, че съдържанието на Ig A е по-ниско от 0,2 мг/единица. *** Финален суспендиращ разтвор. **** За предпочитане е измерването на рН да се извърши в затворена система, за да се избегне загубата на СО2. Измерванията могат да се извършват при друга температура и стойностите да се преизчисляват и съобщават за рН при +22°С.